時(shí)間：2023-05-30 09:25:30
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇鹿茸的作用，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過(guò)程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進(jìn)步。
【摘要】文章探討了鹿茸多肽對(duì)β淀粉樣蛋白誘導(dǎo)脊髓神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用。
【主題詞】鹿茸多肽作用分析
脊髓損傷（spinal cord injury，SCI）是外科常見的創(chuàng)傷，其年發(fā)病率逐年升高。在脊髓損傷中，除了原發(fā)的物理打擊因素造成神經(jīng)細(xì)胞損傷外，已發(fā)現(xiàn)損傷區(qū)及臨近部位的神經(jīng)細(xì)胞存在遲發(fā)性的死亡現(xiàn)象，這種死亡與常見的壞死不同，表現(xiàn)為一種程序性死亡（細(xì)胞凋亡），細(xì)胞凋亡可能參與了脊髓損傷的病理生理過(guò)程。caspase3是凋亡過(guò)程中最重要的蛋白酶，降低其的表達(dá)有助于脊髓損傷的修復(fù)和再生。鹿茸系鹿科動(dòng)物梅花鹿或馬鹿的雄鹿未骨化密生絨毛的幼角。關(guān)于鹿茸多肽混合物，近兩年，有學(xué)者通過(guò)實(shí)驗(yàn)證明鹿茸多肽對(duì)脊髓損傷后的神經(jīng)細(xì)胞有保護(hù)作用，本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用鹿茸多肽作用于β淀粉樣蛋白誘導(dǎo)的脊髓神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用，以進(jìn)一步闡述其對(duì)脊髓神經(jīng)細(xì)胞保護(hù)作用的機(jī)理。
一 實(shí)驗(yàn)材料
15d孕鼠購(gòu)自吉林大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；DMEM培養(yǎng)基、胎牛血清、胰蛋白酶購(gòu)自invitrogen公司；細(xì)胞培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)板購(gòu)自Castar公司；神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）購(gòu)自Sigma公司；鹿茸多肽由長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)惠贈(zèng)；β淀粉樣蛋白(Aβ25-35)、四甲基偶氮唑鹽(MTT)、二甲基亞砜(DMSO)購(gòu)自(Sigma公司)；兔多克隆caspase3抗體購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。
二 實(shí)驗(yàn)方法
1 凝聚態(tài)Aβ25-35的制備用超純水將凍干的Aβ25-35溶解配成100 μmol／L的儲(chǔ)存液，于-20℃ 保存，使用前配成所需濃度，于37℃孵育24 h備用。
2 胎鼠脊髓細(xì)胞懸液制備及培養(yǎng)取孕15d大鼠，10%水合氯醛腹腔麻醉后，無(wú)菌狀態(tài)下取出胎鼠。用Hank’s液沖洗數(shù)遍后，放于培養(yǎng)皿中。在解剖顯微鏡下從背側(cè)完全暴露腦干以下整條脊髓，從正中溝處用鎢絲針切除雙側(cè)脊髓的后外側(cè)部。將取下的脊髓腹側(cè)組織，經(jīng)Hank’s液沖洗后，剝?nèi)ケ砻娴难艿龋蔑@微剪子細(xì)剪切成糜狀，越細(xì)越好；然后用0.25%胰酶37℃消化20min后，用吸管輕輕吹打數(shù)次，經(jīng)200目濾網(wǎng)過(guò)濾，離心棄上清，用含15%胎牛血清培養(yǎng)基以1×106/ml接種于塑料培養(yǎng)瓶中。
將細(xì)胞培養(yǎng)在含15%胎牛血清、100U/ml氨芐青霉素及100U/ml鏈霉素的DMEM培養(yǎng)基中，于37℃、飽和濕度、5 %CO2濃度下培養(yǎng)，2～3d 換液一次。實(shí)驗(yàn)均取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)前12 h細(xì)胞換用無(wú)血清培養(yǎng)液，觀察不同濃度Aβ25-35的作用。
3 MTT比色法檢測(cè)細(xì)胞活力觀察不同終濃度(0、5、10、20、25、30μmol／L)的Aβ25-35作用24 h后，細(xì)胞活力的變化，細(xì)胞接種于96孔板24 h后加入不同濃度的Aβ25-35作用24 h，每個(gè)濃度設(shè)4個(gè)復(fù)孔L，同時(shí)設(shè)與實(shí)驗(yàn)孔平行的空白對(duì)照，最后比色時(shí)以對(duì)照孔調(diào)零。共同孵育24 h后更換培養(yǎng)基，每孔加入180μl的培養(yǎng)基和20μl的MTT(5 mg／ml)，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)4 h，棄培養(yǎng)液，每孔加入200μl DMSO，37℃孵育30 min，至結(jié)晶物充分溶解。在多功能酶標(biāo)儀上測(cè)定570nm的吸光度(D570)，其與對(duì)照吸光度的比值作為相對(duì)細(xì)胞活力。
4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)將細(xì)胞接種于24孔板，待達(dá)到80％融合時(shí)，按下列分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)：A.對(duì)照組，B. Aβ25-35（25μmol/L），C. Aβ25-35（25μmol/L）+鹿茸多肽（400mg/ml）［3］，D.照射Aβ25-35（25μmol/l）+NGF（20ng/ml）組。各組均6復(fù)孔。將24h以后各組細(xì)胞用0.25%胰蛋白酶消化，1000 r/min 離心5min，棄上清；用500μl 5mmol/L EDTA/0.01mol/L PBS洗滌細(xì)胞；再加入50μl 10g/L RNaseA，室溫下孵育30min；最后加入500μl 100mg/LPI染色液，旋轉(zhuǎn)混勻，置4℃避光孵育30min后，流式細(xì)胞儀測(cè)定。
5 免疫細(xì)胞化學(xué)染色將1cm×lcm蓋玻片經(jīng)浸酸及消毒等處理后，放入24孔培養(yǎng)板中，加入10倍稀釋的多聚賴氨酸液，置于CO2 孵箱中1h；棄去多聚賴氨酸液，用DMEM培養(yǎng)基洗一次，將各組細(xì)胞懸液分別接種于各孔，繼續(xù)培養(yǎng)24h；棄去原培養(yǎng)液，用37℃預(yù)熱的0.1mol/L PBS輕洗3次；余按免疫組織化學(xué)試劑盒說(shuō)明操作。
三 統(tǒng)計(jì)方法
應(yīng)用統(tǒng)計(jì)分析軟件SPSS14.0分析數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)，P
四 結(jié)果
1 脊髓神經(jīng)元細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定單細(xì)胞懸液接種后第2d，細(xì)胞聚集成團(tuán)狀，第3d出現(xiàn)大量懸浮的neurosphere(約30～60個(gè)細(xì)胞)，而且neurosphere越來(lái)越多。到第7d細(xì)胞胞體十分飽滿，輪廓清晰，有的細(xì)胞可見明顯的鳥眼狀細(xì)胞核，也有的細(xì)胞伸出樹枝狀突起，突起相互連成網(wǎng)絡(luò)。用神經(jīng)元特異烯醇化酶(NSE)標(biāo)記神經(jīng)元。鏡下觀察，可見實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞胞體飽滿，突起明顯并連成網(wǎng)狀。
2 流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果以400mg/ml劑量觀察鹿茸多肽對(duì)Aβ25-35誘導(dǎo)脊髓細(xì)胞凋亡的抑制作用，并用NGF作為對(duì)照。結(jié)果顯示，Aβ（25μmol／L）+鹿茸多肽（400mg/ml）組細(xì)胞凋亡百分?jǐn)?shù)是19.35±6.74與Aβ組凋亡百分?jǐn)?shù)37.42±12.55比較，有顯著性差異，P
3 免疫組化檢測(cè)caspase3結(jié)果caspase3陽(yáng)性細(xì)胞胞質(zhì)著棕色。結(jié)果顯示：對(duì)照組無(wú)caspase3陽(yáng)性染色的細(xì)胞；Aβ（25μmol／L）+鹿茸多肽（400mg/ml）組caspase3陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)減少，比單純Aβ（25μmol／L）組少，其作用與NGF陽(yáng)性對(duì)照組比較無(wú)差異，鹿茸多肽對(duì)脊髓細(xì)胞凋亡具有抑制作用。
五 討論
脊髓損傷的治療是神經(jīng)科學(xué)領(lǐng)域內(nèi)一道尚未解決的難題，雖然人們采取了許多種方法促進(jìn)損傷后的脊髓軸突再生修復(fù)，但存在許多限制因素，很難達(dá)到理想效果，許多學(xué)者進(jìn)行了深入研究脊髓神經(jīng)組織損傷后再生不良，其重要原因是傷后繼發(fā)性損害不斷加重所致，而細(xì)胞凋亡是繼發(fā)性損傷的關(guān)鍵，抑制細(xì)胞凋亡是阻止或減少繼發(fā)性損傷，保護(hù)神經(jīng)功能的治療所在。
在春節(jié)期間，李先生接連收到兩份親朋好友送來(lái)的鹿茸。他常聽人說(shuō)，鹿茸是一種很好的補(bǔ)藥，如果使用得當(dāng)，可起到溫補(bǔ)腎陽(yáng)、延年益壽的作用。但他在使用鹿茸進(jìn)補(bǔ)時(shí)也感到有些為難：自己的體質(zhì)是否適合吃鹿茸，怎樣吃鹿茸才能取得理想的補(bǔ)養(yǎng)效果呢?
鹿茸是梅花鹿或馬鹿還沒(méi)有骨化的幼角，有“補(bǔ)陽(yáng)第一藥”的盛譽(yù)。中醫(yī)認(rèn)為，鹿茸是大熱滋補(bǔ)之品，具有補(bǔ)氣養(yǎng)血、消除疲勞、補(bǔ)精髓、助腎陽(yáng)、強(qiáng)筋健骨、延年益壽的功效，適合有體質(zhì)虛弱、未老先衰、畏寒、手足發(fā)涼、胃脘冷痛等虛寒癥狀的人服用，尤其適合腎虛者服用。臨床研究發(fā)現(xiàn)，鹿茸中含有25種氨基酸和多種維生素，具有增強(qiáng)免疫力、造血功能及促進(jìn)創(chuàng)傷愈合的作用。有報(bào)道稱，鹿茸還有很好的提升白細(xì)胞和紅細(xì)胞水平的作用。因此，貧血患者及在進(jìn)行放療或化療后血象較低的癌癥患者可吃一些鹿茸進(jìn)行調(diào)治。下面就介紹4種使用鹿茸進(jìn)補(bǔ)的方法：
將鹿茸、人參和肉類食物一起煲成肉湯食用
這種使用鹿茸進(jìn)補(bǔ)的方法最為常見，效果很不錯(cuò)。鹿茸肉湯的制作方法是：取鹿茸片5～10克，雞肉(或鴨肉、鵝肉、鴿肉、羊肉)120克，紅參(或高麗參)12克，食鹽、味精等調(diào)味料各少許。將上述原料一起放入電飯煲或沙鍋內(nèi)加適量的清水燉煮3～5個(gè)小時(shí)，調(diào)入食鹽、味精即成，可隨意服用。
將鹿茸制成鹿茸茶服用
研究發(fā)現(xiàn)，將鹿茸制成鹿茸茶服用，其所含的藥物成分能夠迅速、完全地被人體吸收。鹿茸茶的制作方法是：將0.5～1克的鹿茸片放入水杯中，用適量的開水沖泡后服用(鹿茸片也應(yīng)嚼食服下)，可隔日服1次。鹿茸茶具有較好溫補(bǔ)腎陽(yáng)的作用，腎陽(yáng)偏虛者堅(jiān)持服用此茶數(shù)月必有助益。
將鹿茸和粳米一起煮粥服用
取鹿茸片(或鹿茸粉)0.5～1克，粳米適量。將粳米入鍋加適量的清水熬煮至爛熟，調(diào)入鹿茸片再煮片刻即成，可每日服1次。
將鹿茸制成鹿茸酒服用
對(duì)于喜歡飲酒的人來(lái)說(shuō)，將鹿茸制成藥酒服用是非常適宜的。制作鹿茸酒應(yīng)采用冷浸法，具體的做法是：將30～印克的鹿茸和500～1000毫升的白酒一起放入瓷瓶中，置于陰涼處密封保存，每隔2～3天晃動(dòng)一下酒瓶，連續(xù)浸泡半個(gè)月即成，可每次飲用10～20毫升。酒量不大的人，也可將少量的此藥酒兌入等量的白開水中稀釋后飲用。待此藥酒全部飲完后，可在瓷瓶中添加1000毫升的白酒，將剩下的鹿茸渣再浸泡半個(gè)月后飲用。
需要注意的是，沒(méi)有陽(yáng)虛癥狀的年輕人若使用鹿茸進(jìn)補(bǔ)，可能會(huì)出現(xiàn)全身燥熱、鼻出血、口干唇裂、口舌生瘡等不良反應(yīng)。有五心煩熱、口干、口苦、咽喉干燥或干痛、大便干燥、小便黃赤、目赤、易怒、女性月經(jīng)量多、血色鮮紅、舌紅、脈細(xì)等癥狀者或患有高血壓、糖尿病、感冒、肝腎功能不全、胃炎及消化性潰瘍者不宜服用鹿茸進(jìn)補(bǔ)。
[關(guān)鍵詞]鹿茸；活性成分；鹿茸多肽；鹿茸多胺
中圖分類號(hào)：G154.56 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1009-914X（2015）25-0397-01
對(duì)于鹿茸來(lái)說(shuō)，人們并不是十分陌生，多數(shù)的研究人員都對(duì)其化學(xué)成分以及藥理作用等方面進(jìn)行深入研究，并且取得了一定的成績(jī)。在實(shí)際的研究工作中可以看出，其化學(xué)成分比較多，除了氨基酸類和脂肪酸之外，還有相應(yīng)的含氮類化合物等等。所以說(shuō)，經(jīng)過(guò)提煉之后可以有效的改進(jìn)人體的心血管疾病，增強(qiáng)身體的免疫力。另外，鹿茸的藥理活性也值得研究，在深入研究的過(guò)程中給臨床診療工作提供了重要的數(shù)據(jù)支撐。
1、鹿茸多肽
1.1從鹿茸多肽的存在形態(tài)上看，主要是在體外進(jìn)行分化，主要是從神經(jīng)干細(xì)胞朝著神經(jīng)元的趨勢(shì)發(fā)展。相關(guān)的學(xué)者對(duì)鹿茸多肽的結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其對(duì)神經(jīng)元干細(xì)胞的發(fā)展起到一定的促進(jìn)作用，而且其自身的營(yíng)養(yǎng)成分也比較豐富。在促進(jìn)神經(jīng)元干細(xì)胞分化的過(guò)程中還可以對(duì)多因子成分進(jìn)行調(diào)節(jié)，這樣才能夠協(xié)調(diào)神經(jīng)系統(tǒng)的運(yùn)行。
1.2在提升人體皮膚愈合速度的過(guò)程中可以采用馬鹿茸多肽成分，主要是通過(guò)促進(jìn)人體表皮細(xì)胞的增殖來(lái)促進(jìn)傷口的愈合程度。在進(jìn)行這一研究的過(guò)程中，相關(guān)的學(xué)者主要是應(yīng)用家兔和乳鼠等動(dòng)物來(lái)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。在其體外加入相應(yīng)的天然鹿茸多肽以及合成鹿茸多肽懲罰呢，就可以加速動(dòng)物表皮的修復(fù)程度。可見，鹿茸多肽可以促進(jìn)人體表皮細(xì)胞的愈合，實(shí)現(xiàn)表皮細(xì)胞的增殖。
1.3鹿茸多肽-PLGA復(fù)合膜結(jié)構(gòu)可以提升大鼠周圍神經(jīng)損傷的修復(fù)程度。主要是這中鹿茸多肽的成分可以深入到復(fù)合膜中，使得其中的成分進(jìn)行緩慢釋放，直接作用到周圍的神經(jīng)系統(tǒng)。由于其生物活性相對(duì)較強(qiáng)，所以可以為臨床診療提供相對(duì)比較科學(xué)的依據(jù)。
1.4鹿茸多肽可以促進(jìn)神經(jīng)的再生，促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)的修復(fù)功能。在對(duì)鹿茸對(duì)人體的神經(jīng)損傷的修復(fù)程度進(jìn)行研究的過(guò)程中可知，鹿茸多肽可以促進(jìn)神經(jīng)的再生，并且可以加快神經(jīng)系統(tǒng)的生長(zhǎng)，可以在修復(fù)的基礎(chǔ)上完全恢復(fù)功能。
1.5鹿茸多肽可以對(duì)軟骨細(xì)胞的體外凋亡現(xiàn)象進(jìn)行抑制，為了對(duì)這一內(nèi)容進(jìn)行研究，主要是通過(guò)對(duì)兔類的白細(xì)胞進(jìn)行觀察和研究，然后深入到兔類的骨髓部位。對(duì)凋亡的情況進(jìn)行檢測(cè)。然后采用鹿茸多肽成分，就可以提升蛋白酶的活性，進(jìn)而環(huán)境骨髓干細(xì)胞的凋亡形式進(jìn)行環(huán)節(jié)和控制。提升生命體的成活率。可見，鹿茸多肽的活性成分比較明顯，而且對(duì)其進(jìn)行的藥理學(xué)的研究工作還在繼續(xù)。
2、鹿茸多胺具有抗氧化作用
我國(guó)的多數(shù)學(xué)者都對(duì)鹿茸多胺進(jìn)行了深入研究，經(jīng)過(guò)研究可以看出，通過(guò)進(jìn)行體外和體內(nèi)的測(cè)定，鹿茸多胺可以對(duì)鼠類的過(guò)氧化反應(yīng)產(chǎn)生嚴(yán)重的影響。不僅如此，還可以對(duì)體外的NADPH進(jìn)行高效抑制。在體內(nèi)還可以對(duì)四氯化碳成分的擴(kuò)散程度進(jìn)行抑制，形成氧化還原反應(yīng)。這就是鹿茸的抗氧化作用的發(fā)揮。
3、鹿茸精
鹿茸精從其本質(zhì)上看，可以對(duì)小鼠的抗衰老程度進(jìn)行控制，而且通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)對(duì)鹿茸精進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，可見其活性程度比較強(qiáng)?？梢?，鹿茸精對(duì)MAO活性以及蛋白質(zhì)合成也產(chǎn)生了一定的促進(jìn)作用。對(duì)于老鼠來(lái)說(shuō)，其作用明顯高于青年小鼠。
4、鹿茸的活性物質(zhì)
4.1 蛋白多膚類化合物
鹿茸的再生、迅速增長(zhǎng)是依賴于一系列內(nèi)在激素和生長(zhǎng)因子，近年來(lái)已經(jīng)分離出能夠促進(jìn)骨、上皮、血管及神經(jīng)組織生長(zhǎng)的活性蛋白。如堿性磷酸酶、胰島素樣生長(zhǎng)因子、堿性成纖維生長(zhǎng)因子。引、促生長(zhǎng)釋放因子、神經(jīng)生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子及多種鹿茸多肽，已建立了一種高效可行的從鹿茸中提取單胺氧化酶抑制劑、胰島素樣生長(zhǎng)因子的分離技術(shù)路線。
4.2 甾體類化合物
鹿茸的抗炎、強(qiáng)心、補(bǔ)腎及激素樣作用都與其所含甾類衍生物密切相關(guān)。鹿茸中含有雄性激素、雌激素和孕激素等甾體化合物。相關(guān)學(xué)者采用超臨界二氧化碳和溶劑萃取技術(shù)從鹿茸中提取天然性激素的技術(shù)路線。
4.3 多胺類化合物
鹿茸中的多胺類化合物也是一類重要活性成分，它們能刺激核酸和蛋白質(zhì)合成。鹿茸尖部的多胺含量較高，且從上到下遞減。
5、鹿茸的藥理作用
鹿茸具有廣泛的藥理作用，其具有促進(jìn)生殖系統(tǒng)發(fā)育、增強(qiáng)免疫功能、促進(jìn)細(xì)胞增殖和傷口愈合、抗炎鎮(zhèn)痛的作用，已獲現(xiàn)代藥理學(xué)的多方面驗(yàn)證。近年來(lái)的研究熱點(diǎn)主要集中在鹿茸對(duì)心血管系統(tǒng)、神經(jīng)系統(tǒng)的作用以及抗關(guān)節(jié)炎、抗氧化、抗疲勞和抗衰老等方面。
5.1 對(duì)心血管系統(tǒng)的作用
鹿茸醇提物對(duì)心肌梗死模型大鼠心肌損傷有一定的保護(hù)作用。鹿茸醇提物能減小心肌梗死面積，減輕心肌損傷的程度?？s小壞死區(qū)范圍，減少內(nèi)皮素釋放，減輕缺血區(qū)血管收縮，改善冠脈局部血液循環(huán)，從而延緩和減輕缺血缺氧對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞和心肌細(xì)胞的損傷過(guò)程，對(duì)血管內(nèi)皮損傷起良好保護(hù)、修復(fù)作用。
5.2 對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的作用
鹿茸中存在大量的NGF、IGF。NGF是一個(gè)典型的靶源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，是神經(jīng)元的存活和維持所必需，調(diào)節(jié)神經(jīng)元的表型及神經(jīng)元的連接，參與神經(jīng)再生。IGF具有多種生理功能，特別是影響細(xì)胞的增殖、分化和存活，在個(gè)體生長(zhǎng)發(fā)育中發(fā)揮重要作用。IGF能增強(qiáng)神經(jīng)元的分化。IGF和IGF均可作為肌源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子促進(jìn)神經(jīng)元突起生長(zhǎng)，刺激細(xì)胞增殖、分化、成熟和存活。
5.3 抗關(guān)節(jié)炎的作用
鹿茸的水提物（DAA）富含抗氧化多酚，能夠調(diào)節(jié)骨循環(huán)治療關(guān)節(jié)炎。藥物誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎模型路易鼠注射DAA后，其骨無(wú)機(jī)質(zhì)含量、強(qiáng)度、骨小梁形成數(shù)的減少幅度均小，破骨細(xì)胞的增加幅度也明顯較小。在關(guān)節(jié)炎的慢性期和急性期DAA都能夠消除關(guān)節(jié)的腫脹和畸變，并且在急性期結(jié)束后立即給藥還能夠延緩關(guān)節(jié)炎的發(fā)展。進(jìn)一步的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明DAA還能夠抑制細(xì)胞質(zhì)、溶酶體中的蛋白酶和基質(zhì)蛋白酶類的產(chǎn)生，同時(shí)由自由基引起的對(duì)關(guān)節(jié)液蛋白的損害也下降了20%。因此推斷它是通過(guò)降低蛋白水解酶和自由基的活性達(dá)到治療關(guān)節(jié)炎的作用。
5.4 其他
鹿茸神經(jīng)節(jié)甙酯能促進(jìn)小鼠腦內(nèi)蛋白質(zhì)合成，對(duì)抗記憶破壞藥物的作用，對(duì)小鼠記憶獲得、記憶再現(xiàn)、記憶鞏固均有明顯的促進(jìn)作用。鹿茸提取物對(duì)東莨菪堿及亞硝酸鈉造成的兩種學(xué)習(xí)記憶障礙小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力均有明顯的改善作用。
6、總結(jié)
近年來(lái)、隨著分離純化技術(shù)和分子生物學(xué)的不斷發(fā)展，已經(jīng)從鹿茸中分離得到了具有不同藥理活性的組分，對(duì)部分活性物質(zhì)進(jìn)行合成或者克隆表達(dá)，并初步研究了其結(jié)構(gòu)與功能的關(guān)系。少數(shù)活性物質(zhì)已經(jīng)初步闡明其作用機(jī)制，但仍不夠深入。鹿茸中還有許多活性成分沒(méi)有得到有效的分離，因此如何應(yīng)用系統(tǒng)生物學(xué)方法獲得新的活性物質(zhì)、研究其新的功能與作用機(jī)制，仍需要進(jìn)一步的深入探索。
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鹿茸為梅花鹿或馬鹿的雄鹿未骨化密生茸毛的幼角，前者習(xí)稱“花鹿茸”，后者習(xí)稱“馬鹿茸”。野生梅花鹿為國(guó)家一級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物，馬鹿為國(guó)家二級(jí)重點(diǎn)保護(hù)動(dòng)物。鹿茸，不僅是一味中藥，也是貴重的饋贈(zèng)滋補(bǔ)品。
中醫(yī)認(rèn)為，鹿茸性溫，味甘、咸。歸腎、肝經(jīng)。有壯腎陽(yáng)、益精血、強(qiáng)筋骨、調(diào)沖任、托瘡毒之功效。用于陽(yáng)痿滑精、宮冷不孕、神疲、畏寒、眩暈耳鳴耳聾、腰脊冷痛、筋骨痿軟、崩漏帶下、陰疽不斂。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn)，鹿茸含19種以上氨基酸、類脂、糖類、多胺類等化合物以及鈣、磷、鐵等二十余種元素，具有強(qiáng)壯、抗脂質(zhì)過(guò)氧化、延緩衰老、鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜、益智、降壓、抗心律失常、增強(qiáng)免疫、促進(jìn)物質(zhì)代謝、促進(jìn)創(chuàng)傷愈合、抑制胃潰瘍、增強(qiáng)等多方面的作用。
梅花鹿家養(yǎng)于吉林、黑龍江、遼寧、河北、北京、天津、江蘇、四川、上海等地，馬鹿家養(yǎng)于新疆、青海、黑龍江、內(nèi)蒙古、四川西部、云南等地。 雄鹿從第三年開始鋸茸，“二杠”(具一個(gè)分枝者)每年采2次，第一次在清明后45~50天，習(xí)稱“頭茬茸”，第二次約立秋前后，習(xí)稱“二茬茸”；“三岔”(具二個(gè)分枝者)每年采收1次，通常在7月下旬鋸取。鹿茸需經(jīng)加工方可用于治病和保健，一般取鹿茸，燎去茸毛，刮凈，以布帶纏繞茸體，自鋸口向小孔灌入熱白酒或黃酒，并不斷添酒，至潤(rùn)透或灌酒稍蒸，橫切薄片，壓平，干燥；鹿茸粉則取鹿茸，燎去茸毛，刮凈，劈成碎塊，研成細(xì)粉。
【藥材性狀】
一支鹿茸的切片部位不同，其性狀、名稱和質(zhì)量也不同。
以梅花鹿為例，其鹿茸頂部細(xì)嫩，呈棕黃色，光亮，皮內(nèi)半透明黃白色，蠟狀油潤(rùn)，制成的是“血片”或“蠟片”，為類圓形或橢圓形薄片（厚0.4～0.5毫米），直徑2厘米以內(nèi)，斷面淡紅棕色，半透明，微顯光澤，邊緣有一紅棕色或棕色環(huán)，無(wú)骨質(zhì)，質(zhì)堅(jiān)韌。鹿茸的中上部切片稱 “頭沙片”，接下的部位為“二沙片”，統(tǒng)稱“粉片”，為圓形或類圓形略厚片（0.5～1毫米），直徑2～3厘米，中間密布蜂窩狀細(xì)孔，半透明，角質(zhì)，無(wú)骨質(zhì)或略具骨質(zhì)，邊緣有黃褐色環(huán)，寬1～2毫米，周邊粗糙，偶可見殘留的毛茸。氣微腥，味微咸。
馬鹿茸血片、蠟片為圓形薄片，表面灰黑色，中央米黃色，半透明，微顯光澤，外皮較厚，周邊灰黑色，質(zhì)堅(jiān)韌。氣微腥，味微咸。粉片中央有細(xì)蜂窩狀小孔，外皮較厚，周邊灰黑色，質(zhì)堅(jiān)脆。
鹿茸粉為灰白色或黃色粉末。氣微腥，味微咸。
【小竅門】
正品鹿茸片入水不變形，加熱攪拌不破碎，煮沸不軟不糊，一些偽品入水軟化變形，加熱攪拌則破碎，煮沸會(huì)成糊狀。
【辨別真?zhèn)巍?/p>
因?yàn)槁谷踪Y源稀少，不法分子為牟利將偽劣品混跡市場(chǎng)，影響大眾的健康。
常見鹿茸偽品：
1. 用鹿角片冒充，呈圓形和半月牙形，中部焦黃色，孔大且多破裂，有些孔內(nèi)有黑褐色填塞物，白色，邊緣角質(zhì)化程度高，甚至?xí)旋X狀突起；
2. 將藥廠提取過(guò)的鹿茸粉曬干，用雞蛋清調(diào)和后用鹿皮包裹，加工成薄片，外觀無(wú)蜂窩狀，口嘗粘舌，并能化掉；還有將酒泡或工業(yè)提取過(guò)的鹿茸片（有效成分被抽提過(guò)），除去酒氣，冒充鹿茸片。
3. 用動(dòng)物皮毛（如老鼠皮）包裹其他動(dòng)物骨，或骨膠、松香經(jīng)切制而成，有的以豬皮包裹面粉、豬血混合物，還有用小野貓皮包裹淀粉、豬肝、骨膠、瓊脂混合物再切片。呈類圓形片狀，大小不等，較重，不易折斷，斷面棕紫色，無(wú)蜂窩狀的細(xì)孔，有的有粗孔，偶有凹點(diǎn)，外皮毛有接縫且可剝離，腥氣濃；有的外皮為真品鹿茸片，里面填充其他物質(zhì)。
4. 以鹿科其他動(dòng)物的幼角，如駝鹿茸、馴鹿茸、水鹿茸、白鹿茸、狍茸、麂茸、白唇鹿茸、麋鹿茸、海南坡鹿茸混充鹿茸。
5. 保健品市場(chǎng)有種棕褐色冒牌貨，片子厚實(shí)，卻易碎裂，外皮無(wú)茸毛，中間沒(méi)有蜂窩狀小孔，色澤區(qū)別明顯，過(guò)渡不自然。遇到碘試劑變藍(lán)紫色，是用淀粉、色素等加工制成的偽品。
劣質(zhì)品：用化學(xué)藥水，如漂白水處理鹿茸片，使之特別凈白，口嘗無(wú)味，但有熒光；將正品中摻加一些提取過(guò)的茸片，如果仔細(xì)檢查，會(huì)發(fā)現(xiàn)有的茸片色淡白，茸灰色，外皮不黑，茸片粉性差，蜂窩狀小孔大或破裂，無(wú)腥氣，味淡，不咸。
最好到正規(guī)藥房購(gòu)買，并注意預(yù)防鹿茸及其飲片發(fā)霉或生蟲，將其充分干燥后與適量花椒放置通風(fēng)干燥處存放。
【如何服用】
在使用前，建議先請(qǐng)中醫(yī)辨證，切不可盲目用藥。
鹿茸作為名貴細(xì)料藥，一般宜研末，每次1~2克，用溫水或溫黃酒吞服或單獨(dú)燉服，避免浪費(fèi)；或配以其他藥粉制丸，而不與其他藥味共煎；或取茸片2克、紅棗1枚、生姜1片、米酒少許裝入有蓋的杯中，加半杯水，隔水文火燉蒸2～3小時(shí)，服藥汁；也可泡酒飲用，一般500毫升酒用5克鹿茸。
鹿茸3～5克與瘦肉、家禽同燉，分次食用后可增強(qiáng)，能治療腰膝酸軟、血虛暈眩、精疲力乏等證。
關(guān)鍵詞 鹿茸；加工技術(shù)；原理；工藝
中圖分類號(hào) R282.74 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 B 文章編號(hào) 1007-5739（2013）05-0309-01
茸鹿是經(jīng)濟(jì)價(jià)值很高的藥用動(dòng)物，特別是鹿茸具有補(bǔ)中益氣、壯陽(yáng)、生精、調(diào)血脈、益智、散瘀、消腫、活血等功效，現(xiàn)代醫(yī)療實(shí)踐中被廣泛用于內(nèi)科、外科、婦科、兒科等多種疾病的治療中。鹿茸加工就是將鮮鹿茸脫水干燥，加工成干品的商品茸，以便于保存和運(yùn)輸。鹿茸加工技術(shù)的好壞直接影響產(chǎn)品的質(zhì)量和經(jīng)濟(jì)效益，是養(yǎng)鹿生產(chǎn)中極為重要的環(huán)節(jié)。
1 排血鋸茸加工技術(shù)
1.1 煮炸方法
1.1.1 第1排水煮炸。首先將水煮沸，浸入鹿茸燙5～10 s，注意全茸都要浸入，只露鋸口。然后將燙過(guò)的鹿茸取出，檢查排除暗傷。對(duì)于有傷痕或者虎口封閉不嚴(yán)等情況，應(yīng)當(dāng)采取措施防止其在煮炸中破裂，增強(qiáng)茸體的抗熱能力，需要敷蛋清面處理，并下水達(dá)到固著封閉的目的。做好上述處理后進(jìn)入第1排煮炸。最初1～5次煮炸的時(shí)間應(yīng)當(dāng)逐次延長(zhǎng)。為了促進(jìn)皮血的排出，在沸水中振蕩和推拉茸干上半部以及嘴頭部分，帶水?dāng)嚢瑁?～3次煮炸后，繼續(xù)下水，直至茸根部分，切忌使鋸口浸入水中。此過(guò)程中可以進(jìn)行靜水煮炸或者動(dòng)水煮炸，即輕輕地做往復(fù)推拉和劃圓運(yùn)動(dòng)。隨著下水煮炸次數(shù)和時(shí)間的增加，茸體內(nèi)部受熱，至4～5次下水時(shí)，血液開始從鋸口排出，此時(shí)應(yīng)用長(zhǎng)針挑鋸口周圍的皮血管，將血栓拔出，并向茸髓部位深刺數(shù)針。為了利于排血，也可以用毛刷蘸溫水刷洗鋸口。逐漸延長(zhǎng)下水煮炸的時(shí)間，當(dāng)鋸口排完大血、流出血沫時(shí)，第1排水煮炸即可結(jié)束[1]。
1.1.2 第2排水煮炸。完成第1排水煮炸后放涼降溫，如果茸皮不燙手便可進(jìn)行第2排水煮炸。第1次與最后一次煮炸的時(shí)間相同，其他的煮炸時(shí)間逐漸縮短。有的鹿茸，在第1排水時(shí)已經(jīng)基本煮好，因?yàn)槠淦け ⒚贾?xì)老、抗熱力差，因此在第2排煮炸過(guò)程中只需煮茸尖和主干上半部，注意在水下、水中間和出水前把眉枝和茸根提出水面，即提根煮頭。為了避免眉枝擼皮，可事先在眉枝尖敷蛋清面。當(dāng)鋸口排出的血沫由多變少，顏色也由深紅變?yōu)榈t，繼而出現(xiàn)粉白沫時(shí)，說(shuō)明全茸基本熟透，茸內(nèi)血液基本排凈，即可結(jié)束第1次水煮炸加工。將鹿茸全部（連同鋸口）入水煮炸10 s左右取出，剝?nèi)サ扒迕?，用毛刷蘸溫水刷去茸皮上附著的油脂污物，再用柔軟紗布或毛巾徹底擦干，連同茸架一起送至風(fēng)干室中，放在通風(fēng)良好的臺(tái)案上風(fēng)干。
1.2 經(jīng)回水烘烤、風(fēng)干和煮頭等工藝后制得成品茸
把鹿茸經(jīng)過(guò)第1水煮炸加工后，第2～4天繼續(xù)煮炸稱為回水?；厮挚煞譃榈?水、第3水和第4水。回水烘烤的主要目的是防腐、消毒、加速干燥。每次回水后都要在68～75 ℃烘干箱中烘烤40～60 min，以促進(jìn)鹿茸的干燥。烘烤以后送風(fēng)干室冷涼風(fēng)干。經(jīng)過(guò)回水（4次煮炸、3次烘烤）后的鹿茸，含水量比鮮茸減少50%以上，以后靠自然風(fēng)干為主，適當(dāng)?shù)倪M(jìn)行煮頭和烘烤。最初5～6 d每隔1 d煮1次茸頭，烘烤20～30 min后自然風(fēng)干；以后便可根據(jù)茸的干燥程度和氣候變化情況不定期地煮頭與烘烤，避免空頭與癟頭。鹿茸每次水煮和烘烤后都應(yīng)送入風(fēng)干室脫水風(fēng)干。每天應(yīng)由專人對(duì)風(fēng)干的鹿茸檢查1遍，對(duì)茸皮發(fā)黏、茸頭變軟的鹿茸及時(shí)回水和烘烤。特別是在空氣濕度大時(shí)，更應(yīng)注意增加煮炸或烘烤次數(shù)，防止糟皮。風(fēng)干室必須通風(fēng)干燥，陰雨天及時(shí)關(guān)好門窗，隨時(shí)撲滅蒼蠅和昆蟲[2]。
2 帶血鋸茸加工技術(shù)
帶血茸是將茸內(nèi)血液全部保留在茸內(nèi)的成品茸，由于茸內(nèi)流體有效成分不流失或少流失，不僅提高了產(chǎn)品質(zhì)量，而且鮮茸的干燥率增加2.4%～3.2%，提高了成品率。帶血茸加工是一項(xiàng)操作復(fù)雜、要求嚴(yán)格的技術(shù)，包括封鋸口、稱重、測(cè)尺、編號(hào)、登記、洗刷茸皮、煮炸與烘烤和煮頭與風(fēng)干等過(guò)程。收茸后的前4 d每天煮炸1次，烘烤2次。從第5天開始，連日或隔日回水、煮頭或烘烤1次。到鹿茸8成干時(shí)可視情況不定期煮頭、烘烤。煮炸時(shí)間、烘烤時(shí)間與溫度視茸的重量、茸形結(jié)構(gòu)、鹿茸種類、茸體分杈處愈合程度、茸皮厚薄及茸質(zhì)老嫩程度靈活掌握。對(duì)分杈處皮薄、封口不嚴(yán)以及其他皮薄處涂蛋清面。破損、外傷應(yīng)做包扎或涂蛋清面處理。
3 雙電子自動(dòng)控制遠(yuǎn)紅外線烤箱加工鹿茸新技術(shù)
該技術(shù)采用現(xiàn)代先進(jìn)電子技術(shù)，根據(jù)鹿茸結(jié)構(gòu)、加熱性質(zhì)和工藝制作而成，具有充分發(fā)揮遠(yuǎn)紅外線加熱效率高、節(jié)約能源、脫水快等特點(diǎn)[3-4]。應(yīng)用該技術(shù)程序簡(jiǎn)便，工效高，成品茸質(zhì)量好，能夠達(dá)到商品規(guī)格要求。其主要工藝流程如下：新鮮鹿茸封鋸口洗刷去污燙煮茸皮冷涼雙電子遠(yuǎn)紅外線加熱烘干冷涼回水雙電子遠(yuǎn)紅外線加熱烘干煮頭造型成品茸。
4 冷藏保鮮、遠(yuǎn)紅外線鹿茸加工技術(shù)
該技術(shù)應(yīng)用現(xiàn)代先進(jìn)技術(shù)，改進(jìn)傳統(tǒng)鹿茸加工技術(shù)，具有程序簡(jiǎn)便、工效高、節(jié)省能源、成品茸質(zhì)量好等特點(diǎn)[3]。主要工藝流程為：新鮮鹿茸封鋸口（排血茸排血）燙洗茸皮吹風(fēng)冷涼冷藏保鮮遠(yuǎn)紅外線加熱解凍吹風(fēng)冷涼回水遠(yuǎn)紅外線烘干吹風(fēng)冷涼煮頭造型成品茸。
5 活性鹿茸加工技術(shù)
5.1 原理和設(shè)備
活性鹿茸加工技術(shù)原理是采用現(xiàn)代生物制品冷凍保鮮和干燥原理，對(duì)新鮮鹿茸進(jìn)行冷凍保鮮與真空脫水干燥的一種新型加工方法。與遠(yuǎn)紅外線烘烤沸水煮炸加工鹿茸方法相比，其加工周期僅是傳統(tǒng)加工方法的1/20～1/15，節(jié)省人力75%，節(jié)省能耗68%，減少破損率97%，增加干茸重3.8%～4.2%。冷凍保鮮茸色澤鮮艷，茸形完整，茸質(zhì)優(yōu)良。活性凍干茸茸皮松軟，色澤鮮艷，茸頭飽滿，開條含血充足，血色鮮紅，不酸敗，無(wú)異味，無(wú)焦化。比傳統(tǒng)方法加工的鹿茸氨基酸總含量高27.59%，谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、堿性磷酸酶（ALP）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（R-CT）、膽堿酯酶（CHE）等7種酶活力高2.5～250.0倍?；钚月谷准庸ぴO(shè)備：大規(guī)格冰箱、水浴消毒器和真空凍干機(jī)。
5.2 活性鹿茸加工工藝
5.2.1 冷凍保鮮。鮮茸稱重登記冷凍貯藏去污消毒冷凍貯藏冷凍保鮮。將收取的鮮茸鋸口向上迅速送入加工室稱重登記，然后放入冰箱內(nèi)冷凍貯藏。在-18～-15 ℃可冷凍貯藏保鮮1～2個(gè)月；在-24～-18 ℃可冷凍貯藏保鮮3～8個(gè)月。
5.2.2 凍干加工。新鮮鹿茸或冷凍保鮮茸速凍脫水活性茸。將鹿茸放入預(yù)冷的凍干箱內(nèi)，箱內(nèi)真空度0.67～1.33 Pa，板溫-48～-38 ℃，冷凍脫水72 h，即可獲得活性凍干茸。
5.3 活性鹿茸加工新技術(shù)的工藝特點(diǎn)
采用冷藏保鮮方法可將零星收取的新鮮鹿茸按照不同規(guī)格和種類分別冷凍貯藏，實(shí)現(xiàn)有計(jì)劃地批量加工作業(yè)，從而提高了加工效率，節(jié)省人力和能源[5-8]。在高真空條件下，使鮮茸內(nèi)的水分速凍成冰，直接升華脫水干燥成干品活性茸，能夠最大限度地保持茸內(nèi)的有效成分及其生理活性。因此，活性鹿茸質(zhì)量更佳。
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【關(guān)鍵詞】綿毛鹿茸草；次生代謝；抑菌活性
Abstract：［Objective］ToanalysethecontentofsecondarymetabolismsandantibacterialactivityofMonochasmaSavatieriFranch.exMaxim.［Method］Thecontentsof5secondarymetabolitessuchasflavonoid，chlorogenicacid，tannin，phenolandanthraquinonesinthedifferentextractsofMonochasmasavatieriFranch.exMaximweredetermined.［Results］Itshowedthattheantibacterialactivityoftheliquidsextractedwith70%ethanol，60%acetoneonStreptococcuspneuoncae，Staphylococcusaureus，EscherichiacoliandBacillussubtilisweremoderate，whilethatoftheliquidsextractedwithwaterwasweak.Theliquidsextractedwith70ethanolwerethebetterinhibitorofStreptococcuspneuoncaeandStaphylococcusaureus，whiletheliquidsextractedwith60acetonewerethebetterinhibitorofEscherichiacoliandBacillussubtilis.［Conclusion］TherewaspositivecorrelationbetweentheantibacterialactivityoftheliquidsofMonochasmasavatieriFranch.exMaximonEscherichiacoliandthecontentofthechologenicacid.TherewasalsomarkedcorrelationbetweenthatofBaillussubtilisandanthraquinones.
Keywords：monochasmaSavatieriFranch.exMaxim；secondarymetabolism；antibacterialactivity
綿毛鹿茸草(MonochasmasavatieriFranch.exMaxim)為唇形科鹿茸草屬植物，別名白頭翁、千重塔、白頭毛，分布于浙江、福建、江西，常生于山坡向陽(yáng)處雜草中或馬尾松林下［1］。主要功能為清熱解毒，祛風(fēng)行氣，涼血止血，祛痰，用于感冒，慢性氣管炎，肺炎，咳血，吐血，便血，牙齦炎，牙髓炎，乳癰，癰腫，小兒口瘡，風(fēng)濕關(guān)節(jié)痛等。本文對(duì)綿毛鹿茸草的不同提取液中總黃酮、總綠原酸、總生物堿、總皂甙及其對(duì)肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌抑菌活性進(jìn)行研究，并探討這五類次生代謝產(chǎn)物與抑菌活性之間的相互關(guān)系。
1實(shí)驗(yàn)與方法
1.1實(shí)驗(yàn)材料和儀器綿毛鹿茸草于2007年6月采自浙江千島湖姥山林場(chǎng)的山坡上。采集時(shí)將棉毛鹿茸草全草用濕布包裹，塑料袋封裝，立即帶回實(shí)驗(yàn)室。將材料洗凈，防入105℃恒溫干燥箱中固定25min，再在80℃條件下干燥24h，研磨后經(jīng)過(guò)0.25mm金屬網(wǎng)篩，將烘干樣品放入磨口廣口瓶，置于干燥器中保存，備用［2］。標(biāo)準(zhǔn)品蘆丁、綠原酸、小蘗堿、人參皂甙Rb，1，8二羥基蒽醌購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所，所用試劑均為分析純。四種菌種均由浙江臺(tái)州醫(yī)院無(wú)償贈(zèng)送。培養(yǎng)基為牛肉膏培養(yǎng)基。吸光度的測(cè)定在T6新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì)上完成。
1.2綿毛鹿茸草提取液的制備稱取綿毛鹿茸草粉末3份，每份1g，其中2份分別用70%乙醇、60%丙酮在80℃水浴中回流6h，進(jìn)行提取，離心取上清液，并清洗殘?jiān)?次，離心取上清液，將3次上清液合并；另1份用沸水進(jìn)行提取0.5h，離心取上清液，反復(fù)多次，直至提取液色淡，并將幾次沸水提取液混合。將乙醇、丙酮、沸水提取液的濃縮，并調(diào)節(jié)pH至7.0，然后用蒸餾水定容至1ml，放入4℃的冰箱中待用。
1.3次生代謝產(chǎn)物含量的測(cè)定
1.3.1總黃酮的提取與測(cè)定［3］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用甲醇定容至25ml，取其中1ml，置10ml離心管中，加入4ml0.1mol/L三氯化鋁-甲醇溶液，搖勻，在420nm處測(cè)定吸光度。以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=9.6101x+0.0147，R2=0.9991。
1.3.2總綠原酸的提取與測(cè)定［4］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用95%乙醇定容至25ml，取1ml，置25ml容量瓶中，加入0.2mol/LHCl定容至刻度，搖勻，以試劑空白為對(duì)照，在324nm處測(cè)定吸光度。以綠原酸為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=66.064x+0.0134，R2=0.9995。
1.3.3總生物堿的抽提與測(cè)定［5］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用90%乙醇定容至25ml。取提取液1.4ml置于精密加入4ml氯仿的分液漏斗中，加入7.2×10-4mol/L溴甲酚綠pH=4.42緩沖溶液0.6ml，振搖1min，靜置1h，取澄清的氯仿液，以試劑空白作對(duì)照，于417nm處測(cè)定吸收度。以小檗堿為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=6.6x-0.0102，R2=0.9999。
1.3.4總皂甙的提取與測(cè)定［6］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，揮去溶劑后用甲醇定容至25ml，取1ml置25ml容量瓶中，揮去溶劑后，加入0.2ml5%香草醛冰醋酸溶液，再加入0.8ml高氯酸，于70℃水浴加熱20min，取出，冷卻，加5ml冰醋酸，以試劑空白作對(duì)照，于560nm波長(zhǎng)處測(cè)其吸光度。以人參皂甙Rb為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=27.763x+0.0901，R2=0.9716。
1.3.5游離蒽醌的提取與測(cè)定［7］取上述綿毛鹿茸草提取液樣品0.2ml，放入10ml離心管中，水浴蒸干溶劑，加入5%醋酸鎂乙醇溶液5ml，以試劑空白為對(duì)照，在498nm處測(cè)定吸光度。以1，8二羥基蒽醌為標(biāo)準(zhǔn)品，其回歸方程為y=47.464x+0.0012，R2=0.9996。
1.4抑菌活性的研究以濾紙瓊脂擴(kuò)散法測(cè)定綿毛鹿茸草三種溶劑提取物對(duì)肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌效果。將經(jīng)過(guò)記數(shù)的菌液稀釋后，控制100μL含104cfu，涂平板。將滅菌后濾紙片（直徑為6mm）浸泡在棉毛鹿茸草提取液中。在已涂菌的平板上放置上述濾紙片，并以蒸餾水為陰性，鏈霉素為陽(yáng)性對(duì)照，每一樣品重復(fù)3次。處理后的平板放在30℃培養(yǎng)24h，觀察并記錄抑菌圈的直徑大?。?］。
1.5數(shù)據(jù)的處理試驗(yàn)處理及數(shù)據(jù)測(cè)定均重復(fù)3次，將所得數(shù)據(jù)輸入SPSS11.5forWindows數(shù)據(jù)分析系統(tǒng)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，并對(duì)次生代謝產(chǎn)物的含量與抑菌圈的大小進(jìn)行相關(guān)分析。
2結(jié)果與分析
綿毛鹿茸草不同提取液次生代謝產(chǎn)物含量以及它們對(duì)四種細(xì)菌的抑菌圈大小如表1所示。其中次生代謝產(chǎn)物的含量為百分含量，抑菌活性以抑菌圈的大小（mm）表示，陰性對(duì)照抑菌圈直徑6mm，陽(yáng)性對(duì)照（鏈霉素）抑菌圈26mm；抑菌圈直徑在6～8mm為微弱抑菌，8～12mm為弱抑菌，12～20mm為中等抑菌，20～24mm為強(qiáng)抑菌。綿毛鹿茸草的的次生代謝產(chǎn)物和抑菌圈直徑的相關(guān)性如表2所示。
表1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產(chǎn)物的含量（g/kg）及其抑菌圈直徑（略）
2.1綿毛鹿茸草提取液次生代謝產(chǎn)物含量和抑菌活性分析從表1中可以看出：總黃酮、總綠原酸、游離蒽醌三種次生代謝產(chǎn)物的含量均為70%乙醇提取液>60%丙酮提取液>水提取液，最高含量分別為1.403g/kg、72.752g/kg、0.043g/kg；生物堿和皂甙的含量為60%丙酮提取液>70%乙醇提取液>水提取液，最高含量為1.677g/kg和5.418g/kg。中國(guó)
對(duì)進(jìn)肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌的抑制作用均是60%丙酮提取液>70乙醇提取液>水提取液，最大抑菌圈直徑為15.47mm和17.40mm，為中等抑菌作用；對(duì)大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用是70乙醇提取液>60%丙酮提取液>水提取液，最大抑菌圈直徑為19.03mm和14.83mm，為中等抑菌作用。水提取液對(duì)肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑均在9～12mm之間，具有弱抑菌作用?？梢钥闯鼍d毛鹿茸草的70%乙醇提取液和60%丙酮提取液是良好的抑菌劑。
2.2不同提取液的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性的相關(guān)性分析從表2可以看出：黃酮與蒽醌之間存在顯著的正相關(guān)，推測(cè)綿毛鹿茸草中這兩種次生代謝產(chǎn)物可能具有相同的合成底物或具有相同代謝途徑；大腸桿菌的抑菌活性與綠原酸的含量具有顯著的正性關(guān)，推測(cè)綿毛鹿茸草對(duì)大腸桿菌的抑制作用可能是提取液中的綠原酸起的作用；蒽醌與枯草芽孢桿菌之間存在極顯著的相關(guān)性，說(shuō)明綿毛鹿茸草對(duì)枯草芽孢桿菌的抑制作用主要是蒽醌作用的結(jié)果；肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌之間具有顯著的相關(guān)性，而與所測(cè)的5種次生代謝產(chǎn)物之間都沒(méi)有顯著相關(guān)性，因此推測(cè)綿毛鹿茸草中其它某些物質(zhì)對(duì)肺炎雙球菌和金黃色葡萄球菌均有一定抑制作用。
表2綿毛鹿茸草不同提取液的次生代謝產(chǎn)物含量與抑菌活性的相關(guān)性（略）
水平顯著差異：*P<0.05，**P<0.01
3討論
次生代謝是植物的重要特征，其產(chǎn)物既具有重要的生態(tài)學(xué)意義又可決定各類植物在進(jìn)化過(guò)程中的興衰成敗、生死存亡等問(wèn)題［9］，植物中的次生代謝產(chǎn)物還具有抗過(guò)敏、降血壓、抗炎、抗菌、抗突變、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化等多種活性。
綿毛鹿茸草對(duì)70%乙醇提取液、60%丙酮提取液、水提取液對(duì)肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均有抑制作用，前兩者為中等抑制作用，后者為弱抑制作用；70%乙醇提取液是肺炎雙球菌、金黃色葡萄球菌的良好抑制劑，60%丙酮提取液是大腸桿菌、枯草芽孢桿菌的良好抑制劑。推測(cè)對(duì)大腸桿菌和枯草桿菌的抑制作用主要由提取液中的綠原酸和蒽醌引起的。
文獻(xiàn)查閱得知：金銀花中綠原酸的平均含量為56.92g·kg-1［10］，巴戟天樣品的游離蒽醌含量為的范圍為0.013～0.049g·kg-1［7］。綿毛鹿茸草70%乙醇提取液中總綠原酸、游離蒽醌的含量72.752g·kg-1、0.043g·kg-1。從中不難看出：70%乙醇提取液是綿毛鹿茸草的良好提取劑。至于綿毛鹿茸草中這些次生代謝產(chǎn)物的分子組成、分子結(jié)構(gòu)等方面內(nèi)容有待進(jìn)一步的研究。
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當(dāng)前,市場(chǎng)上的加有補(bǔ)藥的糖果、糕點(diǎn)、酒、飲料等所謂滋補(bǔ)食品,像鹿茸糖、人參糖、鹿茸酒、杜仲酒、當(dāng)歸飲料等,廠家在商標(biāo)說(shuō)明和廣告上冠之以“青春美容”、“延年益壽”、“養(yǎng)顏回春”、“提神益智”、“抗癌”、“滋補(bǔ)”的美名,吸引了不少人慷慨解囊,競(jìng)相食用。
加藥物的食品并不是適合每個(gè)人吃的,沒(méi)病的健康人吃了不但無(wú)益,反而可能受害。
藥品與食品不同,食品是各種供人食用或者飲用的成品和原料,有些食品對(duì)某些疾病有一定療效,例如綠豆、赤小豆、姜、大棗等,但它不是以治療為目的的。藥品是指用于治療、預(yù)防、診斷疾病或用于規(guī)定有適應(yīng)癥、用法、用量的醫(yī)療用品。無(wú)論是中藥,還是西藥,只能是治療一定的疾病,對(duì)某些患者有治療作用,而對(duì)健康人則是有害無(wú)益的。有些藥品與之間往往只有服用數(shù)量的差別,即藥品在一定的劑量下可以治療疾病,過(guò)量就是,會(huì)引起中毒,甚至發(fā)生更嚴(yán)重的問(wèn)題。
在一些酒、糖果、飲料中加進(jìn)了一些人參、黨參、黃芪、當(dāng)歸、鹿茸、熟地、黃精、杜仲等,這些“補(bǔ)藥”也是藥物,有一定的適應(yīng)癥,只能治療一定的疾病。尤其是其中的人參、鹿茸、黨參,藥理作用較強(qiáng),對(duì)健康人是無(wú)益的,對(duì)兒童甚至是有害的,會(huì)影響其正常發(fā)育。
祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為,“補(bǔ)藥”系為正氣補(bǔ)虛而設(shè),凡身體健康,臟腑活動(dòng)正常者,就不需要使用“補(bǔ)藥”,否則可導(dǎo)致陰陽(yáng)失調(diào),臟腑正?；顒?dòng)受到擾亂;即使是虛癥患者,又分氣虛、陽(yáng)虛、血虛、陰虛四種。因此,“補(bǔ)藥”也根據(jù)其作用和應(yīng)用范圍相應(yīng)地分為補(bǔ)氣藥如人參、黨參、黃芪等;補(bǔ)陽(yáng)如鹿茸等;補(bǔ)血如當(dāng)歸熟地、何首烏等;補(bǔ)陰有枸杞等。不同的虛癥要用相應(yīng)的補(bǔ)藥,如果用藥不對(duì)癥,或者盲目濫用,對(duì)人體不但無(wú)益,有時(shí)反而引起不良后果。
補(bǔ)藥與任何藥物都一樣,是有毒性的。以鹿茸為例,有的人吃了鹿茸會(huì)引起鼻出血、牙齦出血等中毒現(xiàn)象。古人對(duì)鹿茸早有記載:“補(bǔ)精填髓之功效雖甚偉,服食不善,往往發(fā)生吐血、衄血、尿血、目赤、頭暈、中風(fēng)昏厥等癥?！薄吨腥A人民共和國(guó)藥典》明確規(guī)定,高血壓病、腎炎、肝炎及肝腎功能不正常者忌服鹿茸?，F(xiàn)代研究表明,鹿茸中含有雌二醇、雌酮,是鹿茸具有雌激素樣作用的主要成分。實(shí)驗(yàn)還證明,從鹿茸中抽提的鹿茸精含有雄性內(nèi)分泌素,只能用于治療陽(yáng)痿。可見,如果患有高血壓病、腎炎、肝炎的人飲了鹿茸酒,或兒童吃了鹿茸糖是十分有害的。再拿人參來(lái)說(shuō),有的人吃了少量人參就會(huì)引起胃部脹悶、難受,食欲下降;有的兒童吃了就大量流鼻血;如果食用大劑量,更可出現(xiàn)中毒現(xiàn)象,表現(xiàn)為全身玫瑰疹、瘙癢、暈眩、頭痛、體溫升高及出血。此外,有人服當(dāng)歸,也是不適宜的。古代醫(yī)書上就有“腸胃薄弱、泄瀉溏薄及一切脾胃病、惡食、不思食及食不消,并禁用之”的記載。可見加人參、當(dāng)歸的酒、糖等食品也不是人人都可用來(lái)滋補(bǔ)的。加其他補(bǔ)藥的食品也同樣如此。
除加中藥補(bǔ)藥外,有些食品還濫加了一些西藥。比如,有的糖果中加入了洗必泰,一般人食用過(guò)多時(shí)可造成腸道菌群紊亂。有的糖果中加入維生素A、維生素D,稱為電視糖,宣傳說(shuō)吃了它,看電視可保護(hù)眼睛,但食用過(guò)多也可造成維生素A、維生素D中毒。還有的嬰兒蛋卷或餅干中加入谷維素,宣傳說(shuō)能增加營(yíng)養(yǎng),提高大腦功能。其實(shí),谷維素只是治療植物神經(jīng)功能失調(diào)的藥物,主要用于周期性精神病、精神分裂癥、腦震蕩后遺癥等,而無(wú)病食用這種加谷維素的餅干則會(huì)出現(xiàn)皮疹、皮癢、脫發(fā)等許多不良反應(yīng)。
在食品中加入的上述藥物(除維生素A、維生素D外),不是食品的正常成分,也不是人體需要的營(yíng)養(yǎng)素,對(duì)食品本身等于是一種污染。這種在食品中濫加藥物并于市場(chǎng)上銷售的做法,對(duì)人民健康有害,是違反《中華人民共和國(guó)食品衛(wèi)生法》的,也是違反衛(wèi)生部和國(guó)家中醫(yī)藥管理局《禁止食品加藥衛(wèi)生管理辦法》的,在購(gòu)買這類食品時(shí)應(yīng)十分慎重。
祖國(guó)醫(yī)學(xué)傳統(tǒng)上使用某些食品用于治療目的,在醫(yī)學(xué)上稱為食物療法,這與食品中濫加藥物是不同的。如確為治療目的而生產(chǎn)的食品,則應(yīng)視為食物劑型的藥品,經(jīng)藥政部門鑒定、審核后,可作為藥品在藥房出售。按照傳統(tǒng),既是食品又是藥品以及作為調(diào)料的,如大棗、核桃、薄荷、木耳及姜、蔥、蒜、茴香、大料、胡椒、山楂、黑芝麻、桂皮等,加在食品中對(duì)人體無(wú)害,不屬于加藥物食品,人人皆可任意購(gòu)買食用。
1、功效主要就是起到補(bǔ)氣血的作用，同時(shí)也可以起到增加免疫力的作用，如果就是身體比較虛弱，或者是有氣血不足等情況，都可以應(yīng)用鹿茸紅參進(jìn)行燉骨頭服用，同時(shí)也注意不要長(zhǎng)時(shí)間的進(jìn)行應(yīng)用，如果有上火的情況下也盡量減少應(yīng)用，否則也容易導(dǎo)致火大的情況發(fā)生。
2、紅參鹿茸燉骨頭的功效與作用，紅參，性溫，可以用來(lái)補(bǔ)血。
3、鹿茸，可以用來(lái)補(bǔ)虛，對(duì)于治療神經(jīng)衰弱、失眠等有一定的作用。瘦肉，富含蛋白質(zhì)，可以滋陰潤(rùn)燥。
4、紅參鹿茸再加上骨頭放在一起燉湯吃，能夠強(qiáng)健筋骨，溫腎壯陽(yáng)，補(bǔ)血益氣，治療子宮虛冷，還能美容養(yǎng)顏、抗衰老，具有很好的醫(yī)療保健和養(yǎng)生的功效與作用。
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人參+酒補(bǔ)氣虛
中醫(yī)認(rèn)為，人參性溫，味甘、微苦，入脾、肺兩經(jīng)，具有大補(bǔ)元?dú)獾墓πА，F(xiàn)代藥理研究表明，人參中含有的主要有效成分人參皂甙和黃酮類物質(zhì)，具有抗衰老、提高免疫力、調(diào)節(jié)血脂、防止血管硬化等作用。
推薦——人參酒：將人參切成段或薄片，浸入優(yōu)質(zhì)白酒中，加蓋密封，置于陰涼處，每日振搖1次，浸泡7天后飲用。具有大補(bǔ)元?dú)?、補(bǔ)脾益肺、安神益智的功效，尤適用于久病氣虛、脾肺不足者。
阿膠+芝麻補(bǔ)血虛
中醫(yī)認(rèn)為，阿膠性平味甘，入肺、肝、腎三經(jīng)，以滋陰養(yǎng)血著稱。歷代醫(yī)家視阿膠為婦科良藥，對(duì)調(diào)治各種婦科病有獨(dú)特功效，尤得女士們青睞。
推薦——阿膠冰糖煲芝麻：取阿膠500克，浸在1500毫升黃酒內(nèi)，待膠塊呈海綿狀時(shí)，隔水蒸成液體，趁熱加冰糖1000克，當(dāng)糖與膠融為一體時(shí)，加入炒熟的黑芝麻及敲碎的核桃仁各適量，制成黏稠膏滋，每日早晚各取1～2匙，溫開水沖服。
鹿茸+小米補(bǔ)陽(yáng)虛
李時(shí)珍在《本草綱目》中稱：“鹿茸能生精補(bǔ)髓、養(yǎng)血益陽(yáng)、強(qiáng)筋健骨，治一切虛損……”現(xiàn)代藥理研究表明，鹿茸含多種氨基酸、骨膠原、蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)，具有滋補(bǔ)、強(qiáng)壯的作用，服用后可使人精力充沛。
推薦——鹿茸小米粥：將鹿茸研為細(xì)末，每次取1克，放小米粥內(nèi)服用。鹿茸性溫，味甘、咸，入肝、腎兩經(jīng)，具有補(bǔ)腎壯陽(yáng)的功效；小米性溫，有養(yǎng)胃的功效，兩者相配，滋補(bǔ)效果更好。
蟲草+老鴨補(bǔ)陰虛
【關(guān)鍵詞】 鹿茸多肽；大鼠；軟骨細(xì)胞；增殖
Abstract Objective: The purpose of the present was to investigate the effect of pilose antler polypeptides(PAP) on the proliferation of rat chondrocyte in vitro.Methods: The rat articular chondrocytes were isolated by enzyme digestion and sub-cultivated in serial.The 4th chondrocyte was interfered with PAP.The chondrocytes of different generations and the 4th medicine intefered generation were detected with the methods of proliferating cell nuclear antigen ， MTT(methyl thiazolyl tetrazolium) assay for proliferation and Flow cytometry for analyses of cell cycle distribution and PI(proliferation index).Results: With chondrocytes passage time increasing， the proliferating ability of chondrocytes descended.MTT assay showed that the proliferating ability of chondrocytes decreased， the expression of PCNA tapered in the experiment of immunohistochemistry， and PI descended in flow cytometry for analyses.PAP can inhibit the tendency and strengthen the proliferating ability of chondrocytes in serial subcultivation.Conclusion: PAP can significantly improve proliferation of chondrocytes in serial subcultivation.
Key words Pilose antler polypeptides(PAP); Rat; Chondrocyte; Proliferation
關(guān)節(jié)軟骨缺損是臨床上常見的損傷，它可導(dǎo)致關(guān)節(jié)面不平整，從而繼發(fā)骨性關(guān)節(jié)炎。用組織工程軟骨修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損是目前正在嘗試的一種新方法，具有良好的發(fā)展?jié)摿?。關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞是組織工程理想的種子細(xì)胞，但如何分離獲取數(shù)量多、活性高、分化良好的軟骨細(xì)胞是組織工程培養(yǎng)技術(shù)中的重要問(wèn)題之一。近年來(lái)對(duì)生長(zhǎng)因子在關(guān)節(jié)軟骨形成和退變過(guò)程中的作用日益受到重視，并開展了廣泛的研究，認(rèn)為種子細(xì)胞需要適應(yīng)生長(zhǎng)因子的調(diào)控才能獲得良好的生物活性。由于鹿茸生長(zhǎng)的特殊性，故人們推測(cè)鹿茸中可能存在某種活性物質(zhì)控制并刺激鹿茸生長(zhǎng)。鹿茸多肽（PAP）是從梅花鹿茸中提取的一種多肽類生物活性因子，為鹿茸的主要活性成份。因此，本研究采用體外培養(yǎng)大鼠軟骨細(xì)胞的方法，觀察PAP對(duì)其增殖的影響，為優(yōu)化組織工程的種子細(xì)胞提供一定的理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
1 材料
1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠（閩驗(yàn)證字20050001，合格證號(hào)2005C03），清潔級(jí)，福建醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，3～4周齡，體重180～200g，皆為雄性，共8只。
1.2 主要試劑 αMEM培養(yǎng)基(Gibco公司)、胎牛血清（FBS，HyClone公司）；胰蛋白酶1∶250(Trypsin，Amersco公司)、Ⅱ型膠原酶(Sigma公司)、PBS(Gibco公司)；噻唑藍(lán)（MTT，上海申能博采公司），二甲基亞砜(DMSO，Amersco公司)；增殖細(xì)胞核抗原PCNA(美國(guó)NeoMarkers公司)；PAP粉針由長(zhǎng)春中醫(yī)學(xué)院趙文海教授惠贈(zèng)。
2 方法
2.1 大鼠軟骨細(xì)胞的獲取、鑒定與藥物干預(yù)分組情況 取4周齡體重180～200g的SD大鼠，斷頸處死，參考Hu等［1］軟骨細(xì)胞分離培養(yǎng)方法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，獲取軟骨細(xì)胞置于5%CO2混和氣體環(huán)境、37℃恒溫箱內(nèi)單層培養(yǎng)，隔3日首次換液，8～10 天達(dá)85%融合后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。以傳代次數(shù)（passage，P）分組，P0即原代細(xì)胞，P1即第1次傳代后細(xì)胞，P2即第2次傳代培養(yǎng)細(xì)胞，余類推。軟骨細(xì)胞鑒定采用阿力新藍(lán)染色法檢測(cè)GAG合成、免疫組化法及RT－PCR法檢測(cè)Ⅱ型膠原表達(dá)［2］。實(shí)驗(yàn)分組為P2組、P3組、P4組及鹿茸多肽不同劑量組（低、中、高不同藥物濃度干預(yù)后的P4軟骨細(xì)胞組），鹿茸多肽干預(yù)組分組的方法采用傳代分組法：倒置相差顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)P3代軟骨細(xì)胞融合達(dá)到85%時(shí)，進(jìn)行傳代（1傳3），以胰酶消化貼壁細(xì)胞，反復(fù)吹打，使細(xì)胞均勻懸浮，離心（1 500rpm，5分鐘），洗滌2次；對(duì)αMEM（含5%FBS）進(jìn)行加藥，分別配制含不同濃度的PAP培養(yǎng)基，分別加藥使各瓶培養(yǎng)基藥物終濃度為PAP 5μg/mL、PAP 10μg/mL、PAP 15μg/mL；分別以上述不同含藥濃度培養(yǎng)基吹打混勻各瓶P3細(xì)胞，進(jìn)行傳代，使藥物干預(yù)組軟骨細(xì)胞進(jìn)入P4代。按實(shí)驗(yàn)要求調(diào)整細(xì)胞濃度，分別接種軟骨細(xì)胞于底面積25cm2培養(yǎng)瓶（細(xì)胞濃度5×105/mL）、6孔培養(yǎng)板（置入蓋玻片）（細(xì)胞濃度5×105/mL）、96孔培養(yǎng)板（細(xì)胞濃度4×105/mL）， 于37℃、5%CO2飽和濕度孵育箱中孵育，其中PAP分組參考劑量來(lái)源于前期實(shí)驗(yàn)［3］。
2.2 各代軟骨細(xì)胞MTT比色試驗(yàn) 將不同代次大鼠軟骨細(xì)胞以5×104/mL濃度接種于96孔培養(yǎng)板中，常規(guī)培養(yǎng)24小時(shí)后用含體積分?jǐn)?shù)為5%FBS的αMEM培養(yǎng)，并分別加入PAP，使PAP終濃度為5、10、15μg/mL，加藥后分別繼續(xù)培養(yǎng)48小時(shí) ，加入MTT溶液呈色。選擇490nm波長(zhǎng)，在酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀上測(cè)定各個(gè)孔光吸收值。
2.3 各代軟骨細(xì)胞周期分析及增殖指數(shù)檢測(cè) 將培養(yǎng)的待測(cè)各代軟骨細(xì)胞分別置5mL試管中，用PBS或生理鹽水洗2次，制成單細(xì)胞懸液，無(wú)水乙醇固定細(xì)胞，加入PBS調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105～5×106個(gè)細(xì)胞加入1mL DNA熒光染料（PI），室溫下避光染色15分鐘，以流式細(xì)胞儀(Becton Dickinson FACScan，美國(guó))分析各代軟骨細(xì)胞周期及檢測(cè)增殖指數(shù)。
2.4 各代軟骨細(xì)胞免疫細(xì)胞化法檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞PCNA表達(dá) 將不同代次軟骨細(xì)胞接種于6孔板，孔內(nèi)均預(yù)置一塊蓋玻片，常規(guī)培養(yǎng)48小時(shí)后取出蓋玻片，用免疫組織化學(xué)二步法檢測(cè)PCNA表達(dá)情況，結(jié)果分析：采用HPIAS21000高清晰度圖像處理系統(tǒng)進(jìn)行圖像分析，測(cè)定PCNA陽(yáng)性信號(hào)的面積密度( Sv =PCNA陽(yáng)性信號(hào)面積和/窗口面積×窗口數(shù))。
2.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 以上檢測(cè)均隨機(jī)取多個(gè)樣本，每個(gè)樣本多次重復(fù)。應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。進(jìn)行Oneway ANOVA檢驗(yàn)和Pearson相關(guān)分析，定量資料實(shí)驗(yàn)結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P
3 結(jié)果
3.1 各組軟骨細(xì)胞MTT比色結(jié)果 MTT比色分析顯示：隨著軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)，從P2代細(xì)胞至P4代軟骨細(xì)胞在傳代培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞能量代謝呈下降趨勢(shì)，逐代相比OD值有顯著差異（P
圖1 各組軟骨細(xì)胞在不同觀察時(shí)間點(diǎn)的增殖情況(OD值)（略）
3.2 各組軟骨細(xì)胞細(xì)胞增殖指數(shù)結(jié)果 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：隨著軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)，從P2代細(xì)胞至P4代細(xì)胞，細(xì)胞增殖指數(shù)呈下降趨勢(shì)，分別為20.9%、16.8%、12.6%，PAP干預(yù)后的P4各組細(xì)胞增殖指數(shù)高于P4細(xì)胞，分別為19.7%、21.4%、19.4%，其中PAP 10μg/mL組促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖的作用最高，見圖2。
圖2 各組軟骨細(xì)胞細(xì)胞周期PI值（略）
3.3 各組軟骨細(xì)胞PCNA檢測(cè)結(jié)果 免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)各組軟骨細(xì)胞PCNA表達(dá)顯示：隨著軟骨細(xì)胞傳代培養(yǎng)，從P2代細(xì)胞至P4代軟骨細(xì)胞在傳代培養(yǎng)過(guò)程中的陽(yáng)性表達(dá)呈下降趨勢(shì)，逐代相比其陽(yáng)性表達(dá)有顯著差異（P
圖3 各組軟骨細(xì)胞PCNA表達(dá)（略）
A：P2(×400)，B：P3(×400)，C：P4(×600)，D：PAP 10μg/mL(×400)
圖4 各組軟骨細(xì)胞PCNA陽(yáng)性表達(dá)面積密度比值（略）
4 討論
鹿茸具有很強(qiáng)的壯腎陽(yáng)、益精血、強(qiáng)筋骨的作用，是重要的滋補(bǔ)強(qiáng)壯中藥。從藥理上分析，鹿茸內(nèi)含有豐富的多糖類、氨基酸類、脂肪酸類物質(zhì)以及多種生長(zhǎng)因子及其它營(yíng)養(yǎng)成分，可以為軟骨細(xì)胞的生長(zhǎng)提供充足的營(yíng)養(yǎng)條件。鹿茸是一種特殊的骨組織，在春季生發(fā)季節(jié)以1～2cm/d的速度生長(zhǎng)，故推測(cè)鹿茸中可能存在生長(zhǎng)因子促進(jìn)骨質(zhì)和表皮層的增殖。目前王本祥研究室應(yīng)用凝膠過(guò)濾和離子交換層析等技術(shù)，從梅花鹿茸中分離純化出一種多肽，經(jīng)高效液相色譜和N-末端氨基酸分析鑒定為單一多肽，氨基酸組成分析證明，PAP是由68個(gè)氨基酸殘基組成，分子量為7 200［4］。此多肽主要含有纈氨酸、丙氨酸、賴氨酸和甘氨酸，沒(méi)有半胱氨酸。實(shí)驗(yàn)證明PAP具有很強(qiáng)的促進(jìn)骨、軟骨細(xì)胞增殖的作用［5-6］。實(shí)驗(yàn)所見軟骨細(xì)胞在體外傳代培養(yǎng)過(guò)程中細(xì)胞增殖能力呈下降趨勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)從MTT比色分析細(xì)胞能量代謝，流式細(xì)胞術(shù)考察其增殖期細(xì)胞含量，免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)增殖細(xì)胞核抗原表達(dá)等方面看到從P2代細(xì)胞至P4代細(xì)胞，軟骨細(xì)胞增殖能力明顯下降，如何以生長(zhǎng)因子刺激促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖能力對(duì)于將軟骨細(xì)胞作為種子細(xì)胞用于軟骨組織工程具有積極意義。生長(zhǎng)因子對(duì)靶細(xì)胞的調(diào)控與其劑量密切相關(guān)，因此，確定能產(chǎn)生最佳調(diào)控軟骨細(xì)胞增殖的PAP劑量至關(guān)重要。本文在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上用MTT比色試驗(yàn)所篩選的不同劑量的PAP能不同程度地促進(jìn)軟骨細(xì)胞的能量代謝。說(shuō)明PAP能促進(jìn)軟骨細(xì)胞增殖，而且以10μg/mL濃度為最佳。PCNA是一種僅在增殖細(xì)胞中合成或表達(dá)的核內(nèi)多肽，其表達(dá)和合成與細(xì)胞周期有關(guān)。主要表達(dá)增殖細(xì)胞的S期、G1期、G2初期，因此成為檢測(cè)細(xì)胞增殖活性最為有效的標(biāo)志之一。本實(shí)驗(yàn)免疫組化結(jié)果證實(shí)，PAP以10μg/mL濃度時(shí)軟骨細(xì)胞表達(dá)致密的棕褐色顆粒最多，其他組則較少，說(shuō)明PAP可通過(guò)促進(jìn)PCNA表達(dá)來(lái)調(diào)控DNA復(fù)制。細(xì)胞周期與細(xì)胞中DNA含量密切相關(guān)，DNA含量隨著細(xì)胞周期各期而發(fā)生變化。當(dāng)細(xì)胞受到某些因素刺激時(shí)，可使DNA含量發(fā)生變化，從而引起細(xì)胞周期發(fā)生改變。細(xì)胞增殖指數(shù)是S期與G2期DNA含量之和與S期、G2及G1期DNA含量之和的比，它是反映細(xì)胞增殖的重要指標(biāo)之一。本實(shí)驗(yàn)FCM結(jié)果顯示，PAP能顯著提高軟骨細(xì)胞增殖指數(shù)，且以10μg/mL濃度時(shí)最明顯。綜上所述，PAP不僅具有顯著的生物活性，可以促進(jìn)軟骨細(xì)胞的增殖，而且還能阻止軟骨細(xì)胞在連續(xù)體外培養(yǎng)過(guò)程中的增殖衰老趨勢(shì)，本實(shí)驗(yàn)可以為優(yōu)化組織工程中的種子細(xì)胞提供一定理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)，有關(guān)PAP抗軟骨細(xì)胞傳代老化的實(shí)驗(yàn)有待進(jìn)一步探討。
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［2］ 陳曉東，林建華.大鼠軟骨細(xì)胞分離培養(yǎng)與鑒定［J］.福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)， 2006，16(6)，27-29.
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［4］ Zhang ZQ，Zhang Y，Wang BX，et al.Purification and Partial Characterization Of Anti-inflammatary Peptide from Pilose Antler of Cervus Nippon temminck［J］.Acta Pharmaceutica Sinica ，1992，27(5):321-324.
1、人參和鹿茸
人參和鹿茸片搭配在一起泡茶喝效果特別好，人參和鹿茸片都是具有滋補(bǔ)功效的中藥材，它們搭配在一起泡茶喝會(huì)讓滋補(bǔ)功效更加出色，人參能補(bǔ)中益氣，鹿茸片則能補(bǔ)益精血，它們一起泡茶喝，對(duì)人體氣血虧虛或體質(zhì)虛弱都有明顯緩解作用。
2、人參和枸杞
人參和枸杞也是泡茶喝的理想搭檔，它們搭配在一起泡茶喝，不但能讓人體吸收豐富營(yíng)養(yǎng)還能增強(qiáng)人體免疫力，人生中的人參皂苷和枸杞中的枸杞多糖被人體吸收以后都能促進(jìn)免疫細(xì)胞再生，增強(qiáng)人體免疫功能，出現(xiàn)免疫力低下是集食用人參和枸杞泡茶喝就能讓情況有所好轉(zhuǎn)。
3、人參當(dāng)歸和黃芪
人參還可以和當(dāng)歸與黃芪等中藥材搭配在一起泡茶喝，當(dāng)歸能補(bǔ)益氣血，提高人體造血功能，而黃芪則能緩解人體中氣不足，人生又是一種能大補(bǔ)元?dú)獾闹兴幉模鼈兇钆湓谝黄鹋菟饶苡行Ь徑馊祟愺w虛，能增強(qiáng)人體素質(zhì)提高人體健康水平。
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1、鹿茸：雄鹿的嫩角沒(méi)有長(zhǎng)成硬骨時(shí)，帶茸毛，叫做鹿茸。是一種貴重的中藥，用作滋補(bǔ)強(qiáng)壯劑，對(duì)虛弱、神經(jīng)衰弱等有療效；
2、鹿胎盤：動(dòng)物之極品，鹿一生充滿活力，無(wú)明顯的體態(tài)衰老現(xiàn)象，這一切皆歸功于其胎盤中的生命原動(dòng)力。同時(shí)鹿胎中還含有鹿胎蛋白、氨基酸、維生素、礦物質(zhì)及人體必需的微量元素。加速新陳代謝，清除體內(nèi)毒素沉積，使人體保持年輕狀態(tài)，有明顯的美容養(yǎng)顏，延緩衰老的作用；
3、鹿骨：補(bǔ)鈣護(hù)鈣二合一，骨骼健康添營(yíng)養(yǎng)，鹿骨含有人體骨骼形成所需全部營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，是天然活性鈣的重要來(lái)源，且含
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